Klasična kromatografija stupaca
2. kromatografski stupac (vrsta rotacije)
3. kromatografski stupac (priručnik)
*** CISPER ZA CIJELO NAPOME
Opis
Tehnički parametri
Klasična kromatografija stupacaje temeljna tehnika razdvajanja koja se široko koristi u kemiji i biokemiji za pročišćavanje i izolaciju komponenti iz smjesa . djeluje na principu diferencijalnog podjele tvari između stacionarne faze upakirane u stupcu i mobilne faze koja teče kroz.
Stacionarna faza, obično čvrsta adsorbent poput silikagela ili glinice, čvrsto je upakirana u staklenu ili plastičnu stupcu . smjesa uzorka uvodi se na vrhu stupca, a zatim dodavanje mobilne faze ili mješavine solventa {2. Faza na temelju njihovih kemijskih svojstava, poput polariteta, veličine i afiniteta za adsorbent .
Spojevi s jačim interakcijama s stacionarnom fazom polako se kreću kroz stupac, dok oni sa slabijim interakcijama brže putuju . Ova diferencijalna migracija rezultira razdvajanjem smjese u različite pojaseve ili frakcije, što se može pojedinačno prikupiti .
Cijenjena je zbog svoje jednostavnosti, svestranosti i isplativosti ., prikladno je i za razdvajanje analitičkih razmjera, identificirati i kvantificirati komponente, te pripremne razdvajanja, kako bi se veća količina pročišćenih tvari i ostala u odnosu na nastup poput HPLC-a. raspon aplikacija .
Parametri
Osnovni principi
|
|
Klasična kromatografija stupaca, poznata i kao kromatografija tekućina, tehnika je razdvajanja rastvora na temelju razlike u raspodjeli stacionarne faze (obično čvrstog adsorbensa) i mobilne faze (otapalo) . Osnovno načelo može se sažeti na sljedeći način: s pomoćnim fazama, a zatim je adSots of Solutted ADSUT-a Korištenje različitih koeficijenata raspodjele između fiksne faze i mobilne faze . U kromatografiji stupca, stacionarna faza obično se sastoji od poroznih čestica (poput silikagela, glinice, aktivnog ugljika, itd. .), koja ima veliku specifičnu površinu i adsorpcijsko središte, a može tvoriti i estres, a tokorske molekule, van der Waals sila i druge interakcije, rezultirale su i drugom interakcijom i drugom interakcijom. Molekule rastvora iz stacionarne faze, a njegov odabir treba odrediti u skladu s polarnošću rastvora i karakteristika adsorpcije adsorbensa . U postupku razdvajanja, rješenje smjese uvodi se u stupac koji sadrži stacionarnu fazu . s protokom mobilne faze, komponente se kreću niz stupac s različitim brzinama zbog različitih adsorpcijskih kapaciteta stacionarne faze ., tako da su više polarni dijelovi, obično su ADS -a, a ADSORDIRANI INDESORDENSKI POLONDINESI ISDI INDERDENTI Komponentu sa slabim polaritetom lako se odvija mobilnom fazom, a brzina kretanja je brža . na ovaj način, svaka komponenta tvori brojne opsege boja na stupcu kako bi se postiglo razdvajanje . |
Analiza aminokiselina
Analiza aminokiselina obično se provodi pomoću tekuće kromatografije, od kojihKlasična kromatografija stupacaJe li uobičajena tehnika . U ovoj metodi, smola za razmjenu iona koristi se kao stacionarna faza za odvajanje aminokiselina prema razlici električnog naboja . aminokiselinama možda treba pretvoriti u oblik koji se može otkriti derivatizacijom prije nego što se uzorak može poboljšati stupac {2} kromatografski stupac .
- Priprema uzorka: Uzorak proteina se hidrolizira na aminokiseline . To se može postići hidrolizom kiseline ili enzimskom hidrolizom . hidrolizirani uzorak treba podvrgnuti pravilnom prethodnom tretmanu, poput uklanjanja proteina.
- Derivatization: In order to improve the sensitivity of amino acid analysis detection and separation selection characteristics, amino acid derivatization is often required. There are two kinds of amino acid derivations: pre - column derivations and post - column derivations. Commonly used pre-column derivatives include phenylene diformaldehyde (OPA), methyl chlorofluorene (FMOC-CI), fenil izotiocijanat (PITC), Dansil klorid (Dansil-CI), 2, 4- dinitrofluorobenzene (fdnb), itd. .
- Odabir stupca: Odaberite stupac pogodan za analizu aminokiselina, kao što su stupac ion Exchange, C18 stupac, C8 stupac itd. .
- Postavljanje kromatografskog stanja: Postavite odgovarajuće kromatografske uvjete, uključujući mobilnu fazu, brzinu protoka, grading program itd. . Uobičajene mobilne faze uključuju međuspremnici koji sadrže ionske parove, poput formata pufera .}
- Analiza uzoraka: Uzorak nakon hidrolize i derivatizacije ubrizgava se u kromatograf za analizu . usporedbom vršne površine i koncentracije svake aminokiseline u uzorku na standardnoj krivulji, sadržaj aminokiselina u uzorku može se kvantitativno analizirati .
- Obrada podataka: Prema području vrha i podataka koncentracije dobivenih analizom, izračunava se sadržaj svake aminokiseline u uzorku, a podaci se obrađuju i rezultat se izvještava .
Mnogo je primjera primjene u analizi aminokiselina, a u nastavku je navedeno nekoliko specifičnih slučajeva:
- Otkrivanje esencijalnih aminokiselina: Upotreba može otkriti sadržaj esencijalnih aminokiselina, poput izoleucina, leucina, lizina itd. . Ove aminokiseline igraju vitalnu ulogu u ljudskom tijelu i važne su za održavanje vitalne aktivnosti i zdravlja .
- Određivanje aminokiselina u kineskoj medicini: U analizi kineske medicine, također se široko koristi za određivanje sadržaja aminokiselina u kineskoj medicini ., na primjer, pri određivanju sadržaja paeoniflorina u tabletama Wuji Baifeng, alumna s oktadecilsilanom, a kolum se može koristiti kao silci, a kolum se može upotrijebiti za analizu kolum kiseline .
- Određivanje aminokiselina u hrani: Sadržaj aminokiselina u hrani također je jedno od važnih područja primjene ., na primjer, u određivanju nukleotida u dojenčadi i mliječnih proizvoda, pet nukleotida u mliječnom prahu može se izolirati i odrediti pomoću C {}18- spuštene i faze, a u stupnju-u stupnju {}}18- t}} {}} t}}} at} at} at} faze attumna i faze attumna i faze atsumn-faze Također se koristi za određivanje sadržaja aminokiselina u drugim namirnicama, što pruža važnu osnovu za kontrolu kvalitete hrane i procjenu prehrane .
U analizi aminokiselina potrebno je odabrati odgovarajuće reagense za derivatizaciju i uvjete derivatizacije kako bi se poboljšala osjetljivost i točnost detekcije .
Izbor stupca i postavljanje kromatografskih uvjeta važan je utjecaj na učinak odvajanja i potrebno ih je optimizirati prema specifičnom uzorku i analitičkim potrebama .
U procesu analize potrebno je obratiti pažnju na uvjete pripreme i skladištenja uzoraka kako bi se izbjegao utjecaj kontaminacije uzorka i degradacije na rezultate analize .
Što je izvedeno liječenje
Derivatizacija je važna tehnika prethodne obrade uKlasična kromatografija stupaca, koji ima za cilj poboljšati učinak detekcije i odvajanje efekta analita . Sljedeće je detaljno objašnjenje postupka derivatizacije:
|
► Svrha liječenja derivatom 1) Poboljšane performanse otkrivanja: Uvođenjem funkcionalnih skupina koje je lako otkriti, analitika generira jači signal na detektoru, poboljšavajući osjetljivost i točnost detekcije . |
|
|
|
► Vrsta liječenja derivatom 1) Izvedba prije stupaca: |
|
Izvedba nakon stupaca ima prednosti dobre obnovljivosti i manje utjecaja čimbenika, ali zahtijeva dodatne instrumente i opremu . 1) Poboljšana osjetljivost detekcije: Na primjer, u analizi aminokiselina, uvođenje lako detektiranih funkcionalnih skupina (poput fluorofora) kroz derivatizaciju prije stupaca može povećati čvrstoću signala aminokiselina na detektoru, poboljšavajući na taj način osjetljivost detekcije . |
|
Klasična kromatografija stupaca, Temeljna tehnika u znanosti o razdvajanju, nastavlja se razvijati s napretkom u materijalima i metodologiji, osiguravajući njegovu relevantnost i u istraživačkim i industrijskim aplikacijama .
Jedan obećavajući smjer je integracija novih stacionarnih faza . inovacije u znanosti o materijalima dovele su do razvoja materijala za pakiranje visokih performansi s poboljšanom selektivnošću, stabilnošću i učinkovitošću . Ovi materijali omogućuju bolje razdvajanje i brže razdvajanja, a pripasnici za visokim i rastućim analizama, ali na industriji
Nadalje, sve se više kombinira s naprednim tehnikama otkrivanja, poput masene spektrometrije, kako bi se poboljšala osjetljivost i točnost . Ova hibridizacija omogućuje sveobuhvatniju analizu složenih smjesa, proširivši primjenjivost tehnike u poljima poput metabolomike {1}
Zaključno, budućnost leži u njegovoj prilagodbi novim materijalima, minijaturizaciji i integraciji s vrhunskim metodama otkrivanja, osiguravajući njegovu kontinuiranu korisnost u modernom znanstvenom i industrijskom pejzaži .
Popularni tagovi: Klasična kromatografija stupaca, Kina klasična kromatografija Klasična kolumna, dobavljači, tvornica
Pošaljite upit
